《发酵茶及茶制品B族和G族黄曲霉毒素测定》征求意见

由安徽农业大学牵头制定的《发酵茶及茶制品B族和G族黄曲霉毒素测定》(项目计划编号：2020-2-47)地方标准已完成征求意见稿，为进一步完善标准的相关内容，按照《安徽省地方标准管理办法》(皖市监发〔2019〕10号)、《地方标准制修订工作指南》的有关规定，现公开征求意见。意见反馈邮箱：zhouyu121121@hotmail.com，截止时间2022年2月10日前。

　　微生物菌群在发酵茶及含茶食品中普遍存在，正常的微生物菌群对发酵茶叶加工及品质形成有重要作用。然而，在不良环境条件下，也容易造成有害霉菌污染，给发酵茶及含茶食品质量安全带来隐患。目前，全世界仍没有针对于茶叶基质的黄曲霉毒素标准检测方法，不同检测结果可比性小、争议大。因此，制定茶叶基质中的黄曲霉毒素检测标准方法尤为重要。

　　本标准规定了发酵茶叶及茶制品中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2(以下简称AFB1、AFB2、AFG1和AFG2)的测定方法。

　　本标准第一法为双柱净化-高效液相色谱柱后光化学衍生法，适用于发酵茶叶及茶制品中AFB1、AFB2、AFG1和AFG2含量的测定。

　　本标准第二法为双柱净化-液相色谱柱串联质谱法，适用于发酵茶叶及茶制品中AFB1、AFB2、AFG1和AFG2含量的测定。

　　本标准章节由：范围、规范性引用文件、方法原理、试剂材料、仪器设备、试验步骤、分析结果计算与表述、精密度及其他等部分组成。其中“试验步骤”和“结果和计算”是本标准的主要技术内容。

　　方法原理：

　　试样中的黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2，用乙腈-水溶液或甲醇-水溶液提取，提取液经多功能净化柱-免疫亲和柱(MFC-IAC)净化和富集，净化液经浓缩、定容和过滤后经液相色谱分离，柱后光化学法衍生，经荧光检测器检测。外标法定量(HPLC-fld)。

　　仪器和设备：

　　1.高速粉碎机。2.超声波/涡旋振荡器或摇床。3.天平：感量0.01g和0.00001g。4.涡旋混合器。5.离心机：转速 ≥6000 r/min。6.玻璃纤维滤纸：快速、高载量、液体中颗粒保留1.6 μm。7.固相萃取装置(配15-50 mL免疫亲和层析针筒)。8.空气压力泵。9.氮吹仪。10.液相色谱仪：配荧光检测器。11.液相色谱柱。12.光化学柱后衍生器(适用于黄曲霉毒素柱后衍生)。13.黄曲霉毒素多功能净化柱或固体萃取柱(以下简称MFC净化柱)。14.免疫亲和柱：AFB1 柱容量 ≥200 ng，AFB1柱回收率≥80%，AFG2的交叉反应率≥80%(验证方法依据GB5009.22-2016)。15.针筒式滤器(100 mL规格)，可连接于空气压力泵。16.一次性针式过滤器：带0.22 μm 微孔滤膜(所选用滤膜应采用标准溶液检验，为有机相滤膜)。17.筛网: 1 mm~2mm 试验筛孔径。

　　样品制备：

　　液体样品(茶水及含茶饮料)

　　采样量需大于500mL，对于袋装、瓶装等密封包装样品，需至少采集3个独立包装(同一批次或号)，将所有液体样品在一个容器中用混匀后，其中任意的100g(mL)样品进行检测。

　　固体样品(红茶、黑茶、含茶食品)

　　采样量需大于1.0kg，用高速粉碎机将其粉碎，过筛，使其粒径小于2mm，混合均匀后，以四分法缩分至100g，储存于样品瓶中，密封保存，供检测用。

　　样品提取：

　　液体样品(茶饮料)

　　取50 mL茶汤(精确至0.01 mL)，然后加入50mL乙腈(精确至0.01mL)、7.5g氯化钠(精确至0.01g)，涡旋1 min，5000 r/min离心10 min，取上清，再加入50 mL乙腈重复提取，然后合并两次上清，并加入2 g 氯化钠(精确至0.01g)，2 g硫酸镁(精确至0.01g)，5 g PVPP(精确至0.01g)，2gPSA(精确至0.01g)，5000 r/min离心10 min，取上清液备用。

　　固体样品(红茶、黑茶、含茶食品)

　　称取5g试样(精确至0.01g)于50mL离心管中，加入25mL乙腈-水溶液(84+16)或甲醇-水溶液(70+30)，涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20 min，将提取液全部转移至针筒式滤器，真空抽滤全部提取液于离心管中，在6000 r/min下离心10 min(或玻璃纤维滤纸过滤)，取上清液备用。

　　定性检测：

　　试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准品色谱峰的保留时间相比较，变化范围应在±2.5%之内。